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生活常识肽库:探索生物活性肽的宝库

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发表于 2024-12-16 22:19:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
肽库,是由大量特定长度且序列不同的肽段构成的,包括了大部分氨基酸序列的排列组合。根据来源分为合成肽库、天然肽库和重组蛋白质肽段库等。合成肽库是是由化学合成手段制备的各种肽序列组成的;天然肽库由生物体内天然存在的肽构成;重组蛋白质肽段库基于蛋白质工程技术构建。

目前肽库筛选和生成的方法如下:

1、噬菌体展示技术
利用该技术可以开发环肽药物,为环肽药物的筛选提供新的策略。噬菌体肽库合成和筛选如下:
(1)原理
噬菌体展示文库的构建是将肽段和蛋白展示于M13丝状噬菌体的pⅢ或者pVⅢ蛋白上,适用于针对特定靶点筛选较高亲和力的环肽配体。其中双环肽结构更复杂、更稳定,被开发用于治疗肿瘤。目前已经生成双环肽-药物偶联物,正在临床试验中进行评估。
(2)筛选
固相化抗原筛选是将靶蛋白直接(通过共价键)或间接(使用生物素或链霉亲和素接头)固定在固体支持物上,与噬菌体库一起孵育一段时间后多次洗涤。该过程重复3-4次,获得噬菌体展示文库;液相化抗原筛选通过孵育生物素标记的目标蛋白,利用磁珠捕获结合的噬菌体。固相筛选消耗较多的蛋白,且蛋白的天然表位会被破坏。液相筛选法具有高效率、高富集等特点。噬菌体文库筛选的方式取决于具体的验需求,均会对噬菌体环肽库的效果造成一定的影响。

2、mRNA展示技术

mRNA展示技术原理是将体外转录DNA库或翻译mRNA库,形成环化多肽,然后通过逆转录产生mRNA-cDNA双链,制备mRNA-环肽库。将mRNA-cDNA与特定的蛋白质一起孵育,多次洗涤去除未结合的多肽,使用PCR扩增编码靶蛋白结合多肽的cDNA作为模板,富集靶蛋白结合多肽。

3、一珠一物技术

该技术可以在短时间内合成大量不同的化合物,并且筛选技术可以帮助研究者迅速地找到具有特定性质的化合物。应用于多肽和寡核苷酸的研宄、蛋白质、合成寡聚体、小分子和寡糖。
一珠一物多肽库的筛选方式如下:(1)磁性分选法是将一珠一物多肽库与生物素化靶标和链霉亲和素包被的磁性颗粒共孵育。阳性多肽珠与磁性颗粒相结合,使多肽珠带上磁性。此时在容器外面放置磁铁即可将阳性多肽珠吸附到容器壁上,而阴性多肽珠则会沉在容器底部。磁性分选法的缺点是假阳性率高,通常需要进行多次筛选。(2)酶联免疫吸附是指通过特异性结合的方法来检测配体(通常是蛋白质)的抗原抗体。在酶联免疫吸附过程中,将一珠一物多肽库与生物素化的靶标一起孵育,随后加入链霉亲和素碱性磷酸酶偶联物。(3)生物素化的靶标与多肽珠的结合将链霉亲和素碱性磷酸酶富集到多肽珠表面,在阳性多肽珠上产生绿松石色沉淀。然后使用微量移液装置手动分离颜色比较深的多肽珠,并彻底清洗以去除绿松石荧光探针和残留的蛋白质。基于荧光的筛选是将荧光探针标记到特定蛋白上,再与一珠一物多肽库进行共孵育。在特定的条件下,部分荧光探针会发出强烈荧光从而点亮珠子,随后手动筛选出阳性多肽珠。基于荧光的筛选法的缺点是筛选速度慢,需要操作员在光学显微镜或荧光显微镜下进行手动操作。

泰克生物致力于抗体领域多年,拥有丰富的经验和成熟的技术,能够为客户提供质的肽库合成和筛选技术、噬菌体展示技术、mRNA展示技术服务。此外,泰克生物对于噬菌体环肽库筛选有着多年经验,可以提供多肽库筛选服务、噬菌体文库筛选服务,还可以提供抗体定制化服务,包括抗体表达及纯化、亲和力测定、抗体测序等,以此满足客户的需求。



事实上抗体开发越来越受到广大客户的欢迎,市场表现力也逐渐提升。泰克生物为客户提供基于M13噬菌体抗体展示系统的高亲和力、高特异性的抗体药物前期发现技术服务,为客户后续的CAR-T/CAR-NK先导序列设计、抗体人源化、药物靶点抗体开发、双特异性抗体开发以及高效阻断型中和抗体开发等下游研发工作提供有力支持。https://www.tekbiotech.com/

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